高效液相色谱常见问题及处理方法包含：柱压，漏液，谱图问题等，凯米斯科技为您提供完善解决方案。

一、柱压

(一)柱压过高

 柱压过高是HPLC柱用户最常碰到的问题。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的问题，您可按下面步骤检查问题的起因。

1、拆去保护预柱，看柱压是否还高，否则是保护柱的问题，若柱压仍高，再检查；

2、把YMC色谱柱从仪器上取下，看压力是否下降，否则是管路堵塞，需清洗，若压力下降，再检查；

3、将柱子的进出口反过来接在仪器上，用10倍柱体积的流动相冲洗柱子，（此时不要连接检测器，以防固体颗粒进入流动池）。这时，如果柱压仍不下降，再检查；

4、更换柱子入口筛板，若柱压下降，说明您的溶剂或样品结晶沉淀或含有颗粒杂质，正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。若柱压还高，请与厂商联系。一般情况下，在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器便可避免柱压过高的问题。

5、进样阀损坏：清洗或更换进样阀。

6、柱温过低：提高温度。

7、在线过滤器阻塞：清洗或更换在线过滤器。

8、流速设定过高：降低流速

9、压力传感器故障：更换压力传感器。

（二）柱压过低

1、漏液：确定漏液位置并维修。

2、压力传感器损坏：更换压力传感器。

3、泵头内有空气：溶剂脱气、启动泵抽出空气。

4、流速设定过低：调整流速。

5、柱温过高：降低温度。

（三）压力波动

1、流动相有溶解气体；用超声波脱气15-30分钟或用充氦气脱气

2、单向阀堵塞；取下单向阀，用超声波在纯水中超20分钟左右，去处堵塞物

3、.泵密封损坏，造成压力波动；更换泵密封

4、.系统存在漏液点；确定漏液位置并维修

5、柱后产生气泡；流通池出液口加负压调整器

6、使用梯度洗脱：由于流动相粘度的变化引起的压力波动。

二、漏液

（一）接头处漏液

1、接头没有拧紧；拧松后再紧，手紧接头以手劲为限，不要使用工具，不锈钢接头先用手拧紧，再用专用扳手紧1/4-1/2圈，注意接头中的管路一定要通到底，否则会留下死体积。

2、接头被污染或磨损；建议更换接头。

3、接头不匹配，建议使用同一品牌的配件。

（二）泵漏液

1、单向阀松动：拧紧或更换单向阀。

2、接头松动：拧紧接头。

3、混合器密封损坏：更换混合器密封或更换混合器。

4、泵密封损坏：维修或更换泵密封件。

5、压力传感器损坏：维修或更换压力传感器。

6、脉冲阻尼器损坏：更换脉冲阻尼器。

7、比例阀损坏：检查隔膜和手紧接头，如果漏液立即更换。

8、放空阀损坏：拧紧放空阀，如果损坏，更换放空阀。

（三）进样阀漏液

1、.转子密封损坏；更换转子密封。

2、.定量环阻塞；清洗或更换定量环。

3、进样口密封松动；调整松紧度。

4、.进样针头尺寸不合适，一般是过短；使用恰当的进样针（注意针头形状）。

5、废液管中产生虹吸；清空废液管。

6、废液管阻塞：更换或疏通废液管。

（四）高效液相色谱柱漏液

1、尾端接头松动：拧紧接头。

2、卡套内有填料：拆下、清洗卡套、重新安装。

3、筛板厚度不合适：使用合适的筛板。

（五）检测器漏液

1、流通池垫片损坏：避免过大的背景压力，更换垫片

2、流通池窗破碎：更换窗口。

3、手紧接头漏液：拧紧或更换。

4、废液管阻塞：更换废液管。

5、流通池阻塞：更换。

三、谱图问题

（一）峰拖尾

1、筛板阻塞：反冲色谱柱、更换进口筛板。

2、色谱柱塌陷：填充色谱柱。

3、.有干扰物质的存在：使用更长的色谱柱、改变流动相或更换色谱柱。

4、流动相PH值不合适：调整PH值，对于碱性化合物，低PH值更有利于得到对称峰。

5、样品与填料表面的活性点发生反应：加入离子对试剂，比如流动相中有铵盐的时适当加大铵盐的含量；加入碱性挥发性修饰剂，比如三乙胺然后用酸调节至原来的PH（建议用非挥发性的磷酸）。

6、流动相中加入适当的四氢呋喃，通常加入量在5%以内即可。

7、酸性或碱性化合物的峰拖尾：使用浓度50-100mM的缓冲液；使用流动相PH等于PKa的缓冲液。
8、样品过载：降低进样量。

（二）峰前延

1、柱温低：升高柱温，最好不要超过40℃。

2、样品溶剂选择不当：使用流动相作为样品溶剂。

3、样品过载：降低样品含量。

4、色谱柱损坏：更换色谱柱。

5、流动相中缓冲盐浓度不足：增加缓冲盐浓度可以增加离子强度，减少因静电的作用引起的前拖。

6、流动相中加入适当的四氢呋喃，通常加入量在5%以内即可。

（三）峰分叉

1、保护柱或分析柱污染：取下保护柱再进行分析。如果必要更换保护柱。如果分析柱阻塞，拆下来清洗。如果问题仍然存在，可能是柱子被强保留物质污染，运用适当的再生措施。如果问题仍然存在，入口可能被阻塞，更换筛板或更换色谱柱。

2、样品溶剂不溶于流动相：改变样品溶剂，如果可能，用流动相作为溶剂。

（四）大峰变形

样品过载：减少到合适的进样量。

（五）早出的峰变形

1、进样量不正确：减少进样量。

2、样品溶剂选择不当：用流动相做溶剂或者使用更弱的溶剂。

（六）早出的峰拖尾程度大于晚出的峰

柱外效应：使用更短、内径更小的管路；使用小体积的流通池。

（七）K’增加时，拖尾更严重

1.反相模式，二级保留效应:.加入三乙胺（碱性样品）；加入乙酸（酸性样品） ；加入盐或缓冲剂（离子样品）；更换一根柱子。

2、正湘模式，二级保留效应：加入三乙胺（碱性样品）；加入乙酸（酸性样品） ；加入水；

3、离子对，二级保留效应：加入三乙胺（碱性样品）。

（八）额外的峰
1、前一次进样的洗脱峰：提高流速；增加运行时间或梯度斜率。

2、倒峰或鬼峰：检查流动相是否纯净；使用流动相作为溶剂；减少进样体积。

（九）保留时间波动及突然变化

1、温控不当；调节好柱温。

2、流动相组分变化；防止流动相蒸发、反应等，做梯度时尤其要注意流动相混合的均匀

3、色谱柱没有平衡；在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱。

4、流速变化：重新设定流速。

5、泵中有气泡：从泵中除去气泡。

6、流动相选择不当：更换合适的流动相。

（十）基线漂移

1、柱温波动：控制好柱子和流动相的温度。

2、流动相不均匀：使用HPLC级的溶剂，高纯度的盐和添加剂，流动相在使用前进行脱气。

3、检测器内流通池被污染或有气体：用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池

4、检测器出口阻塞：去除阻塞物或更换管子。

5、流动相配比不当或流速变化：更改配比或流速。

6、样品中有强保留的物质（高K’值）以馒头峰样被洗脱出，从而表现出一个逐步升高的基线：使用保护住，如有必要，在进样之间或在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子。

7、检测器没有设定在最大吸收波长处：将波长调整至最大吸收波长处。

（十一）分离度降低

1、流动相污染或变质（引起保留时间的变化）：重新配置流动相。

2、保护柱或分析柱阻塞：取下保护住再分析，也可更换保护住，若是分析柱堵，拆下来清洗，如果问题仍然存在，可能是柱子被强保留物污染，也可能是入口处堵，可以更换筛板或色谱柱。

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