色谱技术是一组相关分离方法的总称，色谱柱的一般结构含有固定相（多孔介质）和流动相，根据物质在两相间的分配行为不同（由于亲和力差异），经过多次分配（吸附-解吸-吸附-解吸…），达到分离的目的。

什么是色谱技术（Chromatography）

概念：色谱技术是一组相关分离方法的总称，色谱柱的一般结构含有固定相（多孔介质）和流动相，根据物质在两相间的分配行为不同（由于亲和力差异），经过多次分配（吸附-解吸-吸附-解吸…），达到分离的目的。

简单的说，色谱技术是在特定的色谱柱当中，利用不同物质与固定相的亲和力差异而实现分离的一组技术。其优点是分辨率高，是生化产品纯化、分析的重要手段，这一切均源于其特殊的分离模式，即塔板理论

色谱分离方法的分类

色谱分离方法很多，种类有四、五十种。但常用于生物大分子分离的色谱方法，按机理分，有以下几种：

1、吸附色谱

2、分配色谱

3、离子交换色谱

4、凝胶色谱

色谱分离的基本概念

1、分配系数：可由Langmuir方程得出

K_d=q/c

K_d---分配系数

q、c---溶质在固相和液相中的浓度

2、保留时间（t_R）和保留体积（V_R）：反应样品在柱子中的保留或阻滞能力，是色谱过程的基本热力学参数之一

3、色谱柱的理论塔板数、塔板高度

反应不同时刻溶质在色谱柱中的分布以及分离度与柱高之间的关系

理论塔板数的计算方法：

N---理论塔板数   t_R---保留时间

W_1/2---半峰宽    W_b---峰底宽度

理论塔板高度：

L---柱长

吸附色谱

1、原理：利用溶质与吸附剂之间的分子吸附力(范德华力，包括色散力、诱导力、定向力以及氢键)的差异而实现分离

2、关键要素：吸附剂（固定相）和展开剂（流动相）的选择

3、吸附剂：氧化铝、硅胶、聚酰胺等，均含有不饱和的氧原子或氮原子以及能够形成氢键的基团，如-OH和-NH₂

4、常用的吸附剂：

氧化铝、硅胶、活性炭、纤维素、聚酰胺、硅藻土

5、展开剂的选择

展开剂极性越大，对同一化合物的洗脱能力越大

因此，可以根据实验结果调整展开剂的极性以获得最佳的分离的效果

展开剂选择的原则：

（1）对被分离组分应具有一定的解吸附能力，极性应比被分离物质的极性略小

（2）展开剂应对被分离物质具有一定的溶解能力

6、吸附色谱的操作程序

（1）根据要分离组分的性质（包括极性、分子量、分子结构）选择合适的固定相和流动相

（2）吸附操作：选择合适的操作条件（温度、pH值、流速），进行装柱、平衡、上样，测定穿透样品含量以调整操作参数

（3）洗脱：采用有机溶剂洗涤、调节pH值以及体系离子强度，最大限度地回收目标产物

分配色谱

1、原理：利用溶质在固定相和流动相之间的分配系数不同而分离的方法

2、构成要素：固定相、载体、流动相

载体：通常为惰性材料，能吸附固定相液体

载体种类：

硅胶、硅藻土、纤维素、葡聚糖凝胶

固定相：通常选取各组分溶解度大的溶剂作为固定相

流动相可以是极性的（反相色谱法），也可以是非极性的（正相色谱）

*反相色谱固定相是非极性的流动相是极性的

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