本文介绍高效液相色谱法(HPLC)使用YMC-Pack ODS-A(AA12S05-2546WT)色谱柱分离测定桑叶中苏氨酸、缬氨酸、脯氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸等16种游离氨基酸的含量。

来源：新疆医科大学药学院

作者：孙莲、张煊、孟磊、勉强辉、刘海

HPLC检测桑叶中16种游离氨基酸的含量摘要：

目的：建立柱前衍生法测定桑叶中游离氨基酸的含量。方法：以水超声提取桑叶中的氨基酸，以异硫氰酸苯酯柱前衍生 ,采用反相高效液相色谱法测定氨基酸的含量 。结果 : 桑叶中含有苏氨酸、缬氨酸、脯氨酸、蛋氨酸、谷氨酸、甘氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、天门冬氨酸、γ-氨基丁酸、丙氨酸、组氨酸、胱氨酸、色氨酸、异亮氨酸等16 种游离氨基酸 ; 其中人体必需氨基酸有 7 种 ,人体半必需氨基酸有 1 种，含量占氨基酸总量的 20 %左右 。结论 : 本法不需要专门的氨基酸分析仪，操作简便、灵敏度高，结果准确、可靠 。桑叶中氨基酸的种类齐全、含量丰富 ,具有很高的开发利用价值 。

方法: 使用色谱柱:YM C -Pack ODS -A( 250 mm ×4. 6 mm , 5μ m); 流动相 A : 醋酸钠 15 g ,加纯净水 1 700 mL 溶解 , 用乙酸调 pH 6. 5 , 加水至 1 850 m L , 加乙腈 140 m L , 摇匀 , 过 0. 45
μ m 微孔滤膜 ; 流动相 B : 乙腈 -水( 4 ∶1), 过 0. 45 μ m 微孔滤膜 , 梯度洗脱( 流动相A 与B 比例 : 0 min 为 100 ∶0 , 18. 00 min为 91 ∶9 , 18. 01 min 为 80 ∶20 , 40. 00 min 为 67 ∶33 , 42. 00m in 为 0 ∶100 , 保持 3. 00 min); 流速 : 1. 0 m L ·min - 1 ; 检测波长 : 254 nm ; 柱温 : 43 ℃。

结论：本试验采用异硫氰酸苯酯衍生化法，使桑叶中的氨基酸与异硫氰酸苯酯反应，生成单一、稳定的苯氨基硫甲酰衍生物，经 RP -HPLC 分离后, 于 254 nm 波长处紫外检测 ,具有灵敏度高、衍生化产物稳定等优点 。

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